Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований. Виктор Сбойчаков

Чтение книги онлайн.

СКАЧАТЬ от последнего заключается в том, что гибридизация ведется не между двумя препаратами тотальной ДНК, а между фрагментами ДНК-зонда (обычно в пределах известного гена) и всей ДНК изучаемого микроорганизма. ДНК-зонды метят изотопами или нерадиоактивной меткой (биотином).

      Важное значение в эпидемиологической практике имеют методы внутривидового генетического маркирования штаммов бактерий. К ним относится метод геномной дактилоскопии, или фингерпринтинг (англ. fingerprinting – снятие отпечатков пальцев). Сущность его состоит в рестрикционном анализе ДНК. Очищенную ДНК исследуемого микроорганизма обрабатывают соответствующей специфической эндонуклеазой (рестриктазой), полученные фрагменты ДНК разделяют путем электрофореза в геле. Для каждого исследуемого штамма на электрофореграммах (рестриктограммах) образуется паттерн с характерным набором полос. Число фрагментов, их размер и общая картина расположения специфичны для каждого микроорганизма, как отпечатки пальцев. Сравнивая рестриктограмму контрольного (известного) штамма с рестриктограммой исследуемого штамма, можно определить их тождество или различие. Вариантом метода является риботипирование, когда рестрикции подвергаются участки ДНК, кодирующие рРНК. Метод геномной дактилоскопии позволяет дифференцировать родственные бактерии на внутривидовом уровне.

      5.5. Микробиологические основы генной инженерии и биотехнологии

      Выдающимся достижением генетики и микробиологии является создание генной инженерии. Генной инженерией называют прикладную генетику, которая разрабатывает методы целенаправленной перестройки геномов и их генетической информации на молекулярном и клеточном уровнях. Она включает в себя совокупность приемов, позволяющих перенести генетический материал из одного организма в другой таким образом, чтобы обеспечить наследование и экспрессию перенесенных генов. Применительно к бактериям генная инженерия использует трансгеноз, то есть искусственный перенос генов (обычно генов эукариот) в клетку бактерий.

      Трансгеноз состоит из трех этапов: 1) выделения гена, подлежащего переносу; 2) включения гена в вектор, т. е. в автономно реплицирующуюся генетическую структуру, с помощью которой гены могут быть размножены и введены в клетку-реципиент; 3) передачи вектора с чужеродными генами в клетку-реципиент, где чужеродные гены клонируются (размножаются) в составе хромосом или автономных репликонов и обеспечивают синтез необходимых веществ.

      Первый этап. Его задачей является перенос генов эукариот (человека, животных), контролирующих синтез необходимых веществ (гормонов, ферментов) в геном бактерий. Для преодоления генетического барьера между эукариотами и прокариотами предварительно in vitro получают на матрице зрелой информационной РНК соответствующей локализации в ДНК нужного гена с помощью фермента обратной транскриптазы (ревертазы) копийную ДНК (к-ДНК), содержащую ген с нужной информацией. Необходимый ген выделяют из к-ДНК с помощью специфических СКАЧАТЬ