Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований. Виктор Сбойчаков

Чтение книги онлайн.

СКАЧАТЬ ДНК. Считается, что показатель 60 – 100 % гомологии ДНК указывает на родство на уровне вида. Метод гибридизации ДНК с рРНК выявляет генетические связи между участком ДНК, контролирующим синтез рРНК, и нуклеотидами рРНК. Цистроны, ответственные за синтез рРНК, консервативны и позволяют выявить родственные связи на уровне рода, семейства.

      Наиболее надежным является метод секвенирования ДНК, выявляющий последовательность нуклеотидов в отдельных фрагментах ДНК или всей ДНК хромосомы. Лучшим (наиболее консервативным) объектом исследования является участок ДНК, контролирующий синтез 16S рибосомальной РНК бактерий. ДНК этого фрагмента клонируют, затем секвенируют. Метод секвенирования ДНК является основным в геносистематике; он позволяет выявить родство бактерий на уровне царства, класса, семейства, рода, но недостаточно эффективен для установления вида. Этот метод также помогает установить эволюционные связи бактерий.

      Раскрыт генетический механизм весьма важной для медицины проблемы приобретенной лекарственной устойчивости бактерий. Установлено, что основную роль в быстром формировании устойчивости бактерий к антибиотикам играют R-плазмиды, несущие гены устойчивости к 10 антибиотикам в любых сочетаниях. Они могут передавать гены антибиотикорезистентности чувствительным бактериям за несколько минут, превращая в устойчивую всю популяцию бактерий в организме. До сих пор не существует эффективных средств удаления R-плазмид или блокады их передачи. Пока реальным достижением является применение препаратов, блокирующих активность ферментов, разрушающих антибиотики, которые контролируются R-плазмидами. Например, для инактивации бета-лактамазы используют клавулановую кислоту, сульбактам, тазобактам в сочетании с антибиотиками бета-лактамной группы.

      Установлен генетический контроль факторов патогенности бактерий. Показана возможность локализации этих генов в геномах бактерий, бактериофагов, плазмид. Выявлены механизмы формирования патогенных штаммов среди условно-патогенных бактерий. Это позволяет выявлять патогенные бактерии молекулярно-биологическими методами и целенаправленно получать авирулентные вакцинные штаммы микроорганизмов.

      Крупным достижением в области генетики является разработка метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), отмеченного Нобелевской премией (Мюллис К., 1993). На основе ПЦР создана принципиально новая универсальная система индикации микроорганизмов и диагностики инфекционных заболеваний – геноиндикация. Метод ПЦР позволяет клонировать in vitro определенные участки ДНК, за 2 – 4 ч получить миллионы копий этой ДНК. Сущность метода составляет многократный циклический процесс, попеременно включающий в каждом цикле три этапа: тепловую денатурацию ДНК (плавление), ее отжиг (присоединение синтетических олигонуклеотидных праймеров) и синтез (достраивание второй цепи ДНК термостабильной ДНК-полимеразой). Смена этих этапов происходит в результате изменения температуры СКАЧАТЬ